到目前為止，已經(jīng)報(bào)道有2種非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物（恒河猴、食蟹猴）和4種嚙齒類動(dòng)物（大鼠、小鼠、田鼠、沙鼠），雪貂、家貓以及雞、鴨等禽類可以作為H5N1禽流感病毒動(dòng)物模型用于實(shí)驗(yàn)研究。低致病性H5N1禽流感病毒可以通過(guò)適應(yīng)建立鼠肺適應(yīng)株感染小鼠建立小鼠模型。非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物通過(guò)鼻腔吸入較難感染，通常需要借助輔助器材進(jìn)行定位感染，動(dòng)物感染后體征變化不顯著，肺組織出現(xiàn)局灶性病變。

前期研究顯示雪貂的受體分布情況與人極為接近，呼吸氣道長(zhǎng)，上下呼吸道分腔明顯是流感病毒研究最為理想的動(dòng)物模型，缺點(diǎn)是雪貂受物種特異性限制缺乏相應(yīng)的檢測(cè)試劑。小鼠對(duì)多種流感病毒敏感，一直被選擇作為流感病毒研究的動(dòng)物模型，不僅有完備的檢測(cè)試劑，還有相應(yīng)的基因敲除、轉(zhuǎn)基因小鼠可用于機(jī)制方面的研究。早期研究曾在多種非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物中（非洲綠猴、Pata猴、豬尾猴、食蟹猴）檢測(cè)到血清抗體陽(yáng)性，并推測(cè)猴群感染病毒參與了流感大流行。研究發(fā)現(xiàn)非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物感染禽流感病毒后的臨床改變、病理變化、抗原分布都與人類存在一定差異，研究結(jié)果顯示其對(duì)流感病毒敏感性較雪貂、小鼠低。至今沒有直接證據(jù)表明非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物的受體分布情況與人接近。恒河猴中研究局部肺組織損傷機(jī)制不僅與巨噬細(xì)胞有關(guān)，在研究抗補(bǔ)體機(jī)制中還應(yīng)考慮PAMP的參與，NF-κB 等炎癥信號(hào)途徑的作用，這些研究在非人靈長(zhǎng)類中受到一定限制，目前小鼠可以提供多方面抗補(bǔ)體機(jī)制研究。

受體比較

1) 人呼吸道上皮受體分布情況：α-2，6連接唾液酸糖蛋白受體主要分布在鼻粘膜上皮細(xì)胞, α-2，3連接唾液酸糖蛋白受體分布在鼻旁竇、咽、氣管、細(xì)支氣管上皮上。在終端呼吸性細(xì)支氣管上皮細(xì)胞也表達(dá)α-2，6連接唾液酸糖蛋白受體。α-2，3連接唾液酸糖蛋白受體出現(xiàn)在呼吸細(xì)支氣管與肺泡交界的無(wú)纖毛立方細(xì)支氣管細(xì)胞上，部分肺泡壁細(xì)胞表達(dá)這種受體，這種細(xì)胞為肺泡Ⅱ型細(xì)胞。病人感染H5N1禽流感病毒后，病毒主要分布在肺泡Ⅱ型細(xì)胞內(nèi)。

2) 雪貂除了氣管中極少數(shù)杯狀細(xì)胞既表達(dá)α-2，3SA受體又α-2，6SA受體，其上下呼吸道受體分布與人極為相似，小鼠多表達(dá)α-2，3SA受體，α-2，6SA受體較少，曾局限的認(rèn)為小鼠較適合用于α-2，3SA受體結(jié)合的病毒研究，后有研究發(fā)現(xiàn)受體特異性并不影響某些病毒對(duì)小鼠的致病力和復(fù)制能力。

3)有研究顯示通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)非洲綠猴上皮細(xì)胞與人類流感病毒和禽類流感病毒都有較好的結(jié)合能力，與人類上皮細(xì)胞的結(jié)合能力接近。缺乏實(shí)驗(yàn)證據(jù)顯示其受體與人類受體分布相似度。

6.2感染途徑比較

1) 小鼠、雪貂通過(guò)輕微麻醉后，以吸入式方式感染，感染方式與人極為接近。

2) 恒河猴、綠猴、食蟹猴等需要以環(huán)甲膜穿刺、支氣管鏡定位感染等方式進(jìn)行感染，感染途徑與自然感染途徑差別較大，感染效果通常會(huì)出現(xiàn)肺組織局域性灶狀感染，與吸入性感染方式產(chǎn)生的病變程度、范圍存在一定差別。

感染后癥狀

1) 部分禽流感病毒在猴上皮細(xì)胞中復(fù)制受限或者發(fā)生不同程度的衰減。例如禽來(lái)源的H2N2病毒不能感染猴，H5N1高致病性禽流感病毒需要以高出雪貂感染劑量103倍的劑量感染猴，仍不致死，僅產(chǎn)生一過(guò)性體溫升高。

2) 幾乎所有禽流感病毒都能夠在雪貂中成功復(fù)制，并產(chǎn)生臨床可觀察的改變，例如體溫升高、體重下降、噴嚏、流涕、精神萎靡甚至死亡。

3)H5N1禽流感病毒感染小鼠后出現(xiàn)嚴(yán)重的肺炎，除呼吸道以外還在腦、脾、肝等組織中發(fā)現(xiàn)病毒抗原，并在腦組織中出病理改變，猴感染后在呼吸道以外的組織中未發(fā)現(xiàn)病毒抗原。

CRP基因敲除小鼠和人CRP轉(zhuǎn)基因小鼠在賽業(yè)（蘇州）生物科技有限公司模式動(dòng)物研究中心完成，該中心具有符合國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的動(dòng)物模型制備相關(guān)完備監(jiān)督管理制度。動(dòng)物的繁殖及感染模型評(píng)估在中國(guó)疾控中心動(dòng)物中心完成，所有操作在SFP級(jí)別下遵守二級(jí)生物安全管理規(guī)定進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物尸體實(shí)行無(wú)害化處理，對(duì)生態(tài)環(huán)境無(wú)影響。

1. 雪貂模型感染后臨床癥狀變化

106 TCID50的H3N2病毒和107 TCID50的H3N2病毒感染雪貂的臨床癥狀相似，雪貂在感染后1天出現(xiàn)癥狀，主要表現(xiàn)為流涕、打噴嚏等上呼吸道感染的表現(xiàn)，伴有一定程度的活動(dòng)度下降。根據(jù)其表現(xiàn)設(shè)立了評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：NIH提供的雪貂感染實(shí)驗(yàn)觀察指標(biāo)分為鼻部癥狀和活動(dòng)度兩個(gè)部分，具體指標(biāo)見表1。雪貂感染H3N2后的臨床癥狀評(píng)分所示。

雪貂感染H3N2病毒后出現(xiàn)體溫升高，106TCID50組在感染后第2天、第3天出現(xiàn)體溫升高，107TCID50組在感染后第2天出現(xiàn)體溫一過(guò)性升高（圖2）。雪貂感染H3N2后出現(xiàn)體重下降，106TCID50組由感染后第1天一直持續(xù)到實(shí)驗(yàn)結(jié)束，107TCID50組在感染后第1天呈現(xiàn)體重下降，在感染后第4天到實(shí)驗(yàn)結(jié)束體重開始回升。

2. 雪貂模型感染后病毒在組織中復(fù)制情況

感染后第5天安樂(lè)雪貂，取其肝、脾、肺、小腸、腦組織做病毒滴度測(cè)定。結(jié)果顯示肝、脾、肺、腦組織都未分到病毒，106TCID50組雪貂小腸組織的病毒在101.8-102.3TCID50之間，106TCID50組在101.8TCID50。以上的結(jié)果反映了H3N2病毒感染雪貂是主要以上呼吸道受到病毒感染為主，肺組織受到病毒感染的程度比較低。腸道組織的高病毒滴度從一定程度說(shuō)明H3N2病毒可以感染呼吸道以外的組織臟器，并在其中復(fù)制。

3.雪貂模型感染后病毒在上呼吸道中動(dòng)態(tài)復(fù)制情況

雪貂感染H3N2病毒后，每天取鼻甲骨活檢物做病毒滴度測(cè)定，結(jié)果顯示106TCID50組雪貂在感染后第2天就可以檢測(cè)到病毒，滴度為102.1TCID50，可一直持續(xù)至感染后第4天，但病毒滴度呈下降趨勢(shì)。雪貂感染107TCID50的病毒后鼻甲骨活檢物沒有檢測(cè)到病毒（表3），證實(shí)106TCID50是該H3N2毒株比較合適的感染雪貂劑量。

雪貂感染H3N2后，每天取鼻甲骨活檢物做病毒載量測(cè)定，結(jié)果顯示2個(gè)滴度組雪貂在感染后第1天至感染后第5天，上呼吸道排毒都呈下降趨勢(shì)，兩個(gè)劑量組的病毒載量結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異（圖4）。

4. 雪貂模型感染后肺組織病理檢測(cè)結(jié)果

感染5天后，雪貂安樂(lè)死解剖，大體觀察到肺組織背側(cè)面和腹側(cè)面有散在點(diǎn)狀出血灶，其他組織未見異常。鏡下觀察發(fā)現(xiàn)以肺組織輕度間質(zhì)性肺炎為主要表現(xiàn)，肺組織肺靜脈及肺泡壁毛細(xì)血管明顯擴(kuò)張充血，部分肺靜脈壁及周圍組織明顯水腫，局部支氣管及肺泡上皮細(xì)胞壞死、脫落，肺泡腔內(nèi)可見滲出和漏出的紅細(xì)胞、水腫液、炎細(xì)胞及壞死脫落的上皮細(xì)胞碎屑。其他組織未見明顯異常，106TCID50組與107TCID50組肺組織病變無(wú)顯著性差異。

對(duì)照組動(dòng)物的肺（A）、小腸（C）及感染組動(dòng)物的小腸（D）均未見異常。感染組動(dòng)物肺臟呈局灶性間質(zhì)性肺炎改變，局部肺間隔毛細(xì)血管擴(kuò)張充血，炎細(xì)胞浸潤(rùn)（B）。A、B、C、D：HE×100。

雪貂呼吸道解剖結(jié)構(gòu)上下呼吸道分腔明顯，受體分布與人極為接近，是迄今為止最為敏感的流感病毒感染動(dòng)物模型。它對(duì)人流感病毒高度易感，病毒不經(jīng)適應(yīng)即能使雪貂致病，并易傳播給雪貂和人。在自然條件下，雪貂一般也是通過(guò)呼吸道吸入病毒的方式感染流感病毒，其感染后的發(fā)病過(guò)程和機(jī)體反應(yīng)也與人體相似。雪貂除對(duì)人流感病毒高度易感外，對(duì)禽流感、豬流感病毒也十分敏感，且感染后出現(xiàn)典型癥狀。

分子生物學(xué)研究顯示，這是由于雪貂的呼吸道上皮細(xì)胞表面存在人流感病毒特異性受體α2,6糖鍵連接的唾液酸，而其肺泡上皮細(xì)胞表面也存在著禽流感病毒特異性受體α2,3糖鍵連接的唾液酸。

概括起來(lái)，相較于其他流感動(dòng)物模型，雪貂的優(yōu)勢(shì)為 ：（1）雪貂感染流感病毒后的癥狀、發(fā)病機(jī)制和免疫反應(yīng)與人類極為相似。（2）人甲、乙型流感病毒均可自然感染雪貂，這為在完全控制的群體內(nèi)觀察流感的傳播規(guī)律和流感病毒抗原性的漂移和轉(zhuǎn)變提供了可能。（3）雪貂的氣管較長(zhǎng)，這樣就使其上、下呼吸道區(qū)室化，有利于研究流感病毒對(duì)呼吸道不同區(qū)域的效應(yīng)差異。（4）雪貂作為動(dòng)物模型比嚙齒類大，易于監(jiān)測(cè)其體溫、脈搏和呼吸頻率。（5）在小型動(dòng)物中，雪貂是唯一感染甲型流感病毒后自然出現(xiàn)發(fā)熱反應(yīng)的動(dòng)物模型?；诖耍壳把踝鳛槔硐氲牧鞲袆?dòng)物模型已被廣泛應(yīng)用于流感發(fā)病機(jī)理等各方面的研究，為人類流感研究做出了重要貢獻(xiàn)。

去勢(shì)雪貂（Mustela Pulourius Furo），4-10月齡，500-1000克。實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行血清學(xué)檢查，HI方法檢測(cè)血清H3N2、H1N1、H5N1抗體，抗體陰性為合格雪貂方可入組實(shí)驗(yàn)。

病毒株為A/Brisbane/10/07 (H3N2)，雪貂經(jīng)輕度麻醉后滴鼻感染H3N2病毒。實(shí)驗(yàn)的觀察期為5天。皮下植入體溫芯片用于監(jiān)測(cè)體溫、體重變化。每日觀察雪貂臨床癥變化，在感染后第5天安樂(lè)動(dòng)物，取組織樣本用于監(jiān)測(cè)病毒復(fù)制動(dòng)力曲線和動(dòng)物感染后組織炎癥反應(yīng)檢查。

流感病毒是嚴(yán)重威脅人類健康的一種病原體，它能導(dǎo)致流感疫情甚至世界大流行，流感在各個(gè)年齡階段的人群中都可能爆發(fā)而引起急性發(fā)熱性呼吸道疾病。流感病毒為單股負(fù)鏈RNA病毒，屬于正黏液病毒科，呈球形或絲狀，直徑80-120nm。病毒外層為兩種不同糖蛋白構(gòu)成的輻射狀突起，即血凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)。根據(jù)HA和NA抗原的不同,又可分為許多亞型，H可分為16個(gè)亞型，N有9個(gè)亞型(N1～N9)。H3N2亞型流感病毒1968年最早出現(xiàn)于香港，后傳播到日本、美國(guó)等地，引發(fā)了一場(chǎng)流感世界大流行，致死人數(shù)達(dá)到近100萬(wàn)人。此后，雖未再次引起世界大流行，但散發(fā)流行至今。近年來(lái)，世界范圍的流感流行病學(xué)監(jiān)控和調(diào)查分析顯示，該亞型流感病毒在仍是流行優(yōu)勢(shì)株，僅1968-1992年間我國(guó)發(fā)生的10次流感小流行中就有7次都是由H3N2流感病毒所引起，并且在1998年和2002年我國(guó)也都發(fā)生了較大范圍的H3N2流感流行，其中北京市1998年11-12月的人群總發(fā)病率高達(dá)10%，總發(fā)病人數(shù)達(dá)到了100萬(wàn)以上。

疾病臨床表現(xiàn)及致病機(jī)制

人感染H3N2流感病毒后，癥狀與普通人流感相似，臨床表現(xiàn)包括發(fā)熱（病毒感染發(fā)熱一般是持續(xù)的，但下午較其他時(shí)間溫度要高）、咳嗽、喉嚨痛、身體疼痛、頭痛、發(fā)冷和疲勞等，有些還會(huì)出現(xiàn)腹瀉和嘔吐，重者會(huì)繼發(fā)肺炎和呼吸衰竭，甚至死亡。H3N2流感病毒傳播速度快，人體對(duì)新變異病毒沒有天然抗體。一般通過(guò)打噴嚏、咳嗽和物理接觸方式傳播。感染病毒的患者以青壯年為主，大多數(shù)年齡在25歲至45歲之間。 由于個(gè)人免疫情況不一樣，年輕人、兒童感染后，更容易出現(xiàn)流感樣的癥狀，體溫超過(guò)38℃，全身肌肉酸痛。老年人的反應(yīng)就不會(huì)那么強(qiáng)烈，好多老年人感染后體溫就不會(huì)很高，機(jī)體反應(yīng)沒有兒童敏感。

目前為廣大學(xué)者接受的H3N2流感病毒致病機(jī)制主要有如下幾種：①病毒誘導(dǎo)宿主細(xì)胞產(chǎn)生凋亡是其致細(xì)胞病變的重要機(jī)理之一；②病毒感染后對(duì)細(xì)胞造成的氧化應(yīng)激損傷也是學(xué)者普遍接受的致病機(jī)制；③細(xì)胞因子風(fēng)暴學(xué)說(shuō)等其他學(xué)術(shù)學(xué)說(shuō)和理論。以上3種機(jī)制相互聯(lián)系，并且均與凋亡密切相關(guān)。

流感病毒感染機(jī)體后，可損害呼吸道上皮、肺上皮細(xì)胞，也可損傷肺外器官。不管在體內(nèi)或體外流感病毒都可誘導(dǎo)宿主細(xì)胞凋亡，流感病毒誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡可能是通過(guò)多條途徑實(shí)現(xiàn)的，各條途徑又互相聯(lián)系，參與成分既有病毒的，也有細(xì)胞成分。整個(gè)過(guò)程由于多種細(xì)胞因子及病毒蛋白的參與而變得錯(cuò)綜復(fù)雜。病毒感染引起宿主細(xì)胞凋亡損害宿主，但另一方面，宿主也通過(guò)這一方式限制病毒在機(jī)體內(nèi)的增殖和擴(kuò)散。病毒感染細(xì)胞后，若細(xì)胞迅速發(fā)生凋亡，則不利于病毒的繁殖。