該模型通過長期觀察普通狼瘡小鼠模型，待其到40周齡時(shí)，檢測其dsDNA等，結(jié)合皮膚癥狀變化，來確定慢性狼瘡皮膚病模型的建立。目前國際上尚欠缺類似模型，為研究狼瘡皮膚病發(fā)病機(jī)制提供了工具。

模型動(dòng)物飼養(yǎng)在武漢大學(xué)人民醫(yī)院動(dòng)物房SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證SYXK（鄂）2015-0027。

（1）建筑特點(diǎn)

門采用專用凈化密閉門并配備觀察窗。單向走道呈順時(shí)針走向設(shè)計(jì)。屏障系統(tǒng)內(nèi)共有大鼠飼養(yǎng)室1間，小鼠飼養(yǎng)室3間，隔離觀察室1間，實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備室1間，潔物存放室1間，清洗消毒室1間。此外，屏障系統(tǒng)外配有監(jiān)控室、機(jī)房和配電室等。

（2）設(shè)計(jì)參數(shù)

室內(nèi)溫度：20～26°C；日溫差：≤4°C；相對(duì)濕度：40%～70%；換氣次數(shù)：15～20次/h；氣流速度：≤0．2m/s；壓強(qiáng)梯度：20～50Pa；空氣潔凈度：7級(jí)；菌落數(shù)：≤3個(gè)/皿；氨濃度：≤14mg/m3；噪聲：≤60dB；Z低工作照度：≥200lx；動(dòng)物照度：15～20lx；晝夜明暗交替時(shí)間：12/12h。

（3）通風(fēng)和空調(diào)系統(tǒng)

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室采用全新風(fēng)中央空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)?？諝饨?jīng)過初、中、三級(jí)過濾器后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室內(nèi)環(huán)境。

（4）照明系統(tǒng)

一更、淋浴、二更、氣閘、清潔走道、潔物存放處、污物走道、緩沖間和清洗消毒間、動(dòng)物飼養(yǎng)室、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備間、隔離觀察室和功能實(shí)驗(yàn)室等安裝有手動(dòng)和自動(dòng)開關(guān)，根據(jù)實(shí)際需要，調(diào)節(jié)控制室內(nèi)照明燈。未啟用房間、清潔走道、潔物存放處、污物走道等在每日中午12點(diǎn)和晚上8點(diǎn)開啟紫外線燈照射1h。

（5）通訊系統(tǒng)

因?yàn)镾PF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境和設(shè)施具有特殊要求，人員進(jìn)入后不能隨意出入，而室內(nèi)外的聯(lián)系又十分重要，故室內(nèi)各房間均安裝內(nèi)部電話機(jī)，按照房間順序編排電話號(hào)碼，各室內(nèi)電話可相互連通，并均與監(jiān)控室總機(jī)保持聯(lián)系，保證實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外信息的及時(shí)溝通。

（6）監(jiān)控系統(tǒng)

對(duì)SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的出入口、走道、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)室、功能操作室等重要位置均安裝了可作270°旋轉(zhuǎn)的攝像機(jī)，能夠及時(shí)了解設(shè)施的運(yùn)行狀態(tài)；也能有效督促實(shí)驗(yàn)人員執(zhí)行科學(xué)的操作規(guī)程，避免人為因素造成室內(nèi)環(huán)境和設(shè)施的污染；并對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間的動(dòng)物狀態(tài)和反應(yīng)進(jìn)行觀察，減少對(duì)動(dòng)物的滋擾。

（7）供水系統(tǒng)

SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飲用水以純凈水為宜。本實(shí)驗(yàn)室采用管道供水，將處理后的純凈水用塑膠管道輸送到屏障系統(tǒng)內(nèi)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備室，設(shè)置接水槽，為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物供應(yīng)滅菌的飲用水和屏障系統(tǒng)內(nèi)用水。要經(jīng)常更換和清洗輸水管道，清洗籠具的用水添加適當(dāng)比例的84消毒液。

（8）供電系統(tǒng)、警報(bào)系統(tǒng)和消防設(shè)施

SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室要求全天候不間斷供風(fēng)和供電，如果出現(xiàn)故障，不能及時(shí)發(fā)現(xiàn)和處理，就可能導(dǎo)致環(huán)境設(shè)施的污染、動(dòng)物感染或死亡，造成嚴(yán)重后果。因此應(yīng)對(duì)SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室使用獨(dú)立穩(wěn)定的供電系統(tǒng)，并配備有應(yīng)急電源。在中央空調(diào)機(jī)房控制室安裝風(fēng)機(jī)故障警報(bào)系統(tǒng)，以便及時(shí)檢修和維護(hù)，保證設(shè)施的安全運(yùn)行。

（9）消毒滅菌設(shè)備

為防止外界物品進(jìn)入SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室時(shí)所攜帶的細(xì)菌污染室內(nèi)環(huán)境和造成動(dòng)物交叉感染，按照不同物品的特性，進(jìn)行紫外線照射消毒、渡槽消毒液消毒或?qū)Ｓ玫臋C(jī)動(dòng)門真空滅菌器消毒。

（10）動(dòng)物飼養(yǎng)籠具

飼養(yǎng)大、小鼠的籠具聚碳酸脂材料的塑膠籠具，具有高透明、耐高壓、耐高溫、耐酸堿等特點(diǎn)。通用的不銹鋼籠具長、寬、高分別為40、30、20cm，適用于單籠飼養(yǎng)有特殊要求的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，配有底盤和食槽，確保實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有充足的采食和活動(dòng)空間，同時(shí)也保證室內(nèi)環(huán)境的清潔。

（11）墊料的選擇和使用

在使用塑膠墊料時(shí)，墊料是大小鼠直接接觸的鋪墊物，起到吸濕、保暖和造窩的作用。墊料的好壞直接影響到大小鼠術(shù)后的恢復(fù)、生長發(fā)育和繁殖性能。目前，所使用的墊料主要有玉米秸墊料、刨花墊料。

（12）飼料配制

大小鼠的生產(chǎn)型飼料和維持型飼料必須嚴(yán)格按照國家標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行科學(xué)配制生產(chǎn)。每半年檢測一次飼料的微生物指標(biāo)和有效營養(yǎng)成分指標(biāo)，保證飼料的質(zhì)量。

（1）維甲酸干預(yù)可造成大鼠胚胎整體及第一二鰓弓衍生組織的發(fā)育不良。顱面部發(fā)育異常表現(xiàn)為頭顱外形圓鈍，耳殼較正?？s小，位置向下及向背側(cè)移位，部分胚胎出現(xiàn)無耳畸形，與第一二鰓弓綜合征患者顱面部癥狀相似。

（2）維甲酸干預(yù)對(duì)神經(jīng)嵴來源軟骨細(xì)胞的影響

第一二鰓弓組織形成面部的大部分骨性及軟骨結(jié)構(gòu)，其過程為構(gòu)成第一二鰓弓的神經(jīng)嵴細(xì)胞分化成軟骨細(xì)胞并通過軟骨化骨的過程形成面部的大部分骨性組織。前期工作中我們利用致畸物維甲酸處理神經(jīng)嵴來源軟骨細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)維甲酸可抑制細(xì)胞的增殖及相關(guān)軟骨標(biāo)志性基因的表達(dá)，從而可能導(dǎo)致相關(guān)軟骨及軟骨來源顱面結(jié)構(gòu)發(fā)育不良。利用基因芯片技術(shù)篩選出了維甲酸作用后表達(dá)改變1.5倍以上的基因，通過生物信息學(xué)分析確定多種通路參與了維甲酸導(dǎo)致的先天性顱面畸形的發(fā)生。

（3）本研究證實(shí)了皮下注射維甲酸的有效性及安全性

維甲酸對(duì)皮膚及全身均有一定的毒性，但如圖5所示，皮下注射維甲酸對(duì)注射部位皮膚無明顯影響，顯示了皮下注射維甲酸的局部安全性。

1.Wistar大鼠飼養(yǎng)及合籠：大鼠顆粒飼料喂養(yǎng)，自由飲水，于晚8點(diǎn)將Wistar大鼠按雌雄比2:1合籠，于次日早8點(diǎn)檢查雌鼠陰道，發(fā)現(xiàn)陰栓定為孕0天（G0）。當(dāng)天中午定位孕0.5天（G0.5）。觀察孕鼠一般生長情況，看皮毛是否光滑，精神狀態(tài)是否良好，有無流產(chǎn)現(xiàn)象，隨機(jī)分籠飼養(yǎng)。

2.皮下注射維甲酸, 利用維甲酸干預(yù)大鼠胚胎，對(duì)不同給藥時(shí)間、給藥劑量的相關(guān)胚胎發(fā)育整體指標(biāo)及顱面部發(fā)育指標(biāo)進(jìn)行測量及統(tǒng)計(jì)。發(fā)現(xiàn)G10天干預(yù)對(duì)胚胎整體發(fā)育影響較小，但對(duì)顱面部發(fā)育影響較大，因此更接近于第一二鰓弓綜合征病人整體及顱面部表現(xiàn)。鼻枕距及頂距是顱面部發(fā)育的兩個(gè)重要指標(biāo)，皮下注射維甲酸40㎎/㎏即造成了兩個(gè)指標(biāo)的明顯減小，同時(shí)出現(xiàn)頭顱外形圓鈍。

第一、二鰓弓綜合征是面部常見先天畸形，新生兒發(fā)生率為1/5000-1/4000，多為單側(cè)。病因目前還不完全明確，主要為環(huán)境和遺傳因素是目前小耳畸形病因研究的重點(diǎn)。臨床表現(xiàn)：耳部輕度畸形或下移，重度則僅存耳部皮贅、外耳完全缺損、外耳道閉鎖、中耳聽骨發(fā)育不全，聽力障礙或傳導(dǎo)性耳聾。下頜骨畸形輕度表現(xiàn)為下頜骨升支及髁狀突短小，關(guān)節(jié)窩變淺，重者整個(gè)升支消失，下頜骨體發(fā)育不全，患者面部短小等。

維甲酸是維生素A的衍生物，其生物活性是由一系列受體介導(dǎo)，主要為維甲酸受體（RAR）和維甲酸X受體（RXR）。維甲酸在胚胎發(fā)育中發(fā)揮重要作用，如正常的維甲酸信號(hào)對(duì)于神經(jīng)嵴組織的形成和正常發(fā)育是必須額，對(duì)神經(jīng)嵴發(fā)育中的重要基因也起調(diào)節(jié)作用，其中包括Hox基因，參與神經(jīng)嵴組織發(fā)育的Wnt、成纖維細(xì)胞生長因子等通路也受維甲酸調(diào)節(jié)，維甲酸還參與了胚胎發(fā)育中體軸的建立。眾多臨床報(bào)道及基礎(chǔ)研究均顯示維甲酸可導(dǎo)致多種胚胎畸形，其中即包括先天性小耳畸形。據(jù)統(tǒng)計(jì)孕期接觸維甲酸導(dǎo)致畸形的發(fā)生率顯著高于未接觸者。